随着社会经济的高速发展，我国的工业化程度得到极大提高，但伴随着经济发展而出现的环境问题也日益严重。目前城市生活污水处理已在工艺上取得成熟技术并得到应用，但工业废水特别是含高浓度硫酸盐和重金属离子

液体培养法

液体培养SRB，首先排除培养基内的空气，可以采用高纯氮气吹脱培养基内的空气以及使培养基加热的方法，然后接入适量菌液，在适宜的温度下静置培养。若在培养基上方覆盖一层灭过菌的液体石蜡效果更佳。

固体培养法

⑴稀释摇管法

稀释摇管法是稀释倒平板法的一种变通形式，先将一系列盛有无菌琼脂培养基的试管加热使琼脂熔化并保持在50℃左右，将已稀释成不同梯度的菌液加入到这些已熔化好的琼脂试管中，迅速充分混匀。待凝后,在琼脂柱表面倒一层灭菌的液体石蜡和固体石蜡的混合物，使培养基尽量隔绝空气。培养后，菌落形成在琼脂柱的中间。

困难之处在于菌落的挑取，首先需用一只灭菌针将覆盖的石蜡盖取出，然后再用一只毛细管插入琼脂和管壁之间，吹入无菌无氧气体，将琼脂柱吸出，放在培养皿中，最后用无菌刀将琼脂柱切成薄片进行观察并转移菌落。

该法的不足之处是观察与挑取菌落比较困难，但在缺乏专业设备的条件下，此法仍是一种方便有效地进行厌氧微生物分离、纯化和培养的低成该方法。

⑵叠皿夹层法

叠皿夹层法实质是将菌夹在上下两层培养基之间，使其造成一个相对无氧的环境，从而使SRB能在夹缝中生长。

具体做法是将已经富集好的菌液采用无菌操作技术稀释成不同浓度。将含有质量分数为2%琼脂的固体培养基熔化并保持在50℃左右，在无菌条件下，向培养皿（90mm×15mm）的皿盖中倒入约1/3高度的固体培养基，待其刚刚冷凝后，将不同浓度的稀释液吸取适量，快速涂布平板上，使稀释液渗透约30s后，在培养皿的中间位置倒入同种营养型固体培养基，直到将溢未溢的突起状态，随后迅速盖上皿盖并往下压，最终皿内不能有气泡。

去掉培养皿内外两层侧壁间多余的琼脂，并在其中灌入适量熔化的石蜡，使培养皿侧壁缝隙被石蜡密封，尽量不要留有气泡。培养一周后，在加有二价铁离子的平板中会长出黑色的SRB菌落，在酒精灯旁加热使固体石蜡熔化，由于上下两层培养基凝固时间不同，所以当移去内皿后，用镊子很容易将上层培养基揭起，从而露出下层培养基的菌落。当需要进行菌落挑取时,可以对其进行切块转移，放入液体培养基时捣碎即可。

该方法的优点是培养物均采用涂布或划线生长于营养琼脂夹层中，取菌落时可很方便地做到定点取菌，同时该方法不需要另外创建一个无氧环境，故省时、省力，具备了所有好氧、厌氧分离方法的优点。

⑶Hungate滚管技术

Hungate滚管技术是培养厌氧菌最佳的方法。滚管技术是美国微生物学家亨盖特于1950年首次提出并应用于瘤胃厌氧微生物研究的一种厌氧培养技术。这项技术又经历了几十年的不断改进，从而使亨盖特厌氧技术日趋完善，并逐渐发展成为研究厌氧微生物的一套完整技术。国内外很多专门做厌氧培养的实验室大都采用此技术。

Hungate滚管技术是指将适当稀释度的菌液，在无菌无氧条件下接入含有琼脂培养基的厌氧试管中，然后将其在滚管机或冰盘上均匀滚动，使含菌培养基均匀地凝固在试管内壁上。当琼脂绕管壁完全凝固后，琼脂试管即可垂直放置贮存，并可使少量的水分集中在底部，经过几天的培养后，就可见到厌氧管内固体培养基内部和表面有菌落出现。挑取菌落时也很方便，可以在酒精灯旁用自制的玻璃细管接种针挑取生长状态良好的菌落，快速接到液体培养基中富集培养。

Hungate滚管技术的优点在于，培养基可以在厌氧管内壁上形成一层均匀透明的薄层，同时菌落可以埋藏在培养基内部或生长在表面，同平板涂布法相比，与氧气接触的机会大大减少 [3]  。